實時熒光定量PCR 是一種在DNA擴(kuò)增反應(yīng)中,以熒光化學(xué)物質(zhì)測每次聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)循環(huán)后產(chǎn)物總量的方法。通過內(nèi)參或者外參法對待測樣品中的特定DNA序列進(jìn)行定量分析的方法。
實時熒光定量PCR系統(tǒng)是特異性靶基因檢測與定量的一體化平臺。7500將PCR熱循環(huán),熒光檢測和各種應(yīng)用分析軟件結(jié)合在一起,可以動態(tài)觀察PCR每一循環(huán)各反應(yīng)管中PCR擴(kuò)增 產(chǎn)物逐漸增加的情況。PCR實驗結(jié)束后可以馬上得到定量結(jié)果,無需凝膠電泳分析,無需純化PCR產(chǎn)物,無需進(jìn)行任何實驗操作。具有時間省,靈敏度高,性好和線性范圍寬等優(yōu)點。
實時熒光定量PCR的溫度控制模塊:
溫度控制是qPCR技術(shù)的核心所在,為了實現(xiàn)高度,實時PCR熱系統(tǒng)須確保整個加熱塊的溫度均勻性,確保能夠以相同速率的反應(yīng)處理所有的樣本。
溫控速率
升降溫速度快的是好設(shè)備,但是單一模塊升降溫速度快并不代表樣本升降溫速度也快,所以還要看樣本的升降溫速度是否也快,注意較大升降溫速度≠平均升降溫速度。
溫控精度
控溫模塊中銀質(zhì)半導(dǎo)體控溫模塊目前是比較好的,因為銀是金屬中銀的導(dǎo)熱性能較高,升降溫速度快,孔間溫度均一性好,邊緣效應(yīng)相應(yīng)減少。
金屬的熱傳導(dǎo)系數(shù)表:銀>銅>金>鋁>鐵>錫>鉛。
溫度度和溫度均一性越小越好。