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咨詢電話：19945629638實時熒光定量PCR系統(tǒng)反應(yīng)指的是在PCR進行的同時，對其過程進行監(jiān)測，一般簡寫為。實時定量PCR與終點PCR的區(qū)別在于數(shù)據(jù)可在PCR擴增過程中進行收集。在實時熒光定量PCR中，反應(yīng)以循環(huán)中檢測到目標擴增的時間點為特征，目標核酸的起始拷貝數(shù)越高，則會越快觀察到熒光的顯著增加（擴增曲線越靠近的X值越低）。相反，終點法檢測測量的是PCR循環(huán)結(jié)束時累計的PCR產(chǎn)物量。
實時熒光定量PCR系統(tǒng)的基本原理：
在PCR反應(yīng)體系中加入熒光染料或熒光基團，這些熒光物質(zhì)有其特定的波長。儀器可以自動檢出，利用熒光信號積累，實時監(jiān)測整個PCR進程，在PCR循環(huán)中，測量的信號將作為熒光閾值的坐標。并且引入一個——Ct值概念，Ct值是指產(chǎn)生可被檢測到得熒光信號所需的較小循環(huán)數(shù)，是在PCR循環(huán)過程中熒光信號由本底開始進入指數(shù)增長階段的拐點所對應(yīng)的循環(huán)次數(shù)。
熒光閾值相當(dāng)于基線熒光信號的平均信號標準偏差的10倍。一般認為在熒光閾值以上所測出的熒光信號是一個可信的信號，可以用于定義一個樣本的Ct值。通常用不同濃度的標準樣品的Ct值來產(chǎn)生標準曲線，然后計算相對方程式。
方程式的斜度可以用來檢查PCR的效率，所有標準曲線的線性回歸分析需要存在一個高相關(guān)系數(shù)，這樣才能認為實驗的過程和數(shù)據(jù)是可信的，使用這個方程式計算出未知樣本的初始模板量。實時熒光定量PCR儀都有軟件，可以從標準曲線中自動地計算出未知樣本的初始模板量。
